Лабораторные методы исследования. Протеинурия. Лабораторная диагностика: определение белка в моче

Развитие большинства почечных патологий отличается тем, что они могут иметь довольно продолжительный латентный (скрытый) период. Поэтому такой анализ как определение несомненно является важнейшим для врачей многих специальностей.

Работа нефронов и протеинурия

При ультрафильтрации в состав первичной мочи попадает большое количество различных белковых молекул и аминокислот. Оно и не удивительно, для большинства белок средний размер превышает порог прохождения через мембраны. А молекулы аминокислот являются полярно заряженными. Это также играет роль при их «задержании» на поверхности мембран. Однако в процессе прохождения первичной мочи по канальцам нефрона практически все белки и аминокислоты реабсорбируются (подвергаются обратному всасыванию) в кровь. Из-за чего, вторичная моча может содержать не более сотых доле грамма протеинов.

Нормальные цифры, при определении белка в моче стандартными методами не должны превышать 0,033 грамма на один литр. За сутки же взрослый здоровый человек может выделять до 0,15 грамм. Причем около 1−2% из них являются альбуминами. Остальные же 90% приходятся на (их насчитывает около 30-ти видов) и гликопротеины — основные белки мембран. Последние появляются в моче за счет деятельности подоцитов. Так как, что при работе любой клетки неизбежно постоянное повреждение мембраны. Но это повреждений, во-первых не существенны, а во-вторых они быстро «затягиваются» благодаря постоянным процессам ее регенерации. Так же в эти 90% входят мукопротеиды — белковые молекулы, попадающие в просвет канальцев при работе эпителия петли Генле.

Различают несколько видов протеинурии. Они строятся только на основании анализа мочи на суточный белок.

Нормальная протеинурия. Выделение белка не превышаетуже известных 0,15 грамм за сутки.
Умеренная протеинурия. Выставляется при выделении более 0,15, но менее 3,5 грамм за сутки.
Массивная протеинурия означает, что почками выделяется более 3,5 грамм белковых молекул за 24 часа.

Причины протеинурии и механизмы ее развития

Согласно основным механизмам ультрафильтрации и реабсорбции, превышений количества белка, выделяемого мочой, может явиться результатом поражения канальцев, клубочков и мочевыводящих путей.

Поражение клубочков. Приводит к так называемой клубочковой протеинурии. При нормальных условиях, белки задерживаются мембраной. Только небольшое количество может проходить через ее поры. Поэтому у канальцев не предусмотрено наличие специальных механизмов реабсорбции белков, которые туда практически не попадают. Здесь речь идет об альбуминах. Они хотя и задерживаются мембранами подоцитов, но в состав первичной мочи попадает не более 2%, так как благодаря своему отрицательному заряду они задерживаются у базальных мембран и не попадают в Полость капсулы нефрона. Однако при разрушении мембраны, альбумины устремляются в полость капсулы и из канальцев уже не реабсорбируются. Именно поэтому при клубочковой патологии отмечается небольшая степень протеинурии: удельный вес альбуминов не позволяет сильнее реагировать индикаторам, которые используются для определения белка в моче.
Патология канальцев. Здесь ультрафильтрация не нарушена. На так как страдает реабсорбция абсолютная степень протеинурии будет значительно за счет того, что в состав вторичной мочи входит большое количество грубодисперсных белков. Но и здесь необходимо оговориться, что для ее определения необходимы более чувствительные индикаторы. Так как действие большинства из них направлено на определение количества заряженных белковых частиц. Коими являются в первую очередь альбумины и которые при данных ситуациях повышаются не значительно, или во все находятся в пределах нормы. В связи с чем анализ мочи на общий белок может давать ложные результаты о реальных размерах протеинурии.

Определение белка в моче

Это важно! Основным способом для регистрации протеинурии является тест на белок в моче. Для чего используются специальные индикаторы. Минимальным порогом для чувствительности большинства таких индикаторных палочек является значение в 30 миллиграмм на литр.

Однако и здесь необходимо помнить, что тест-полоск чувствительна к концентрации белка в пределах сотых долей миллиметра от ее поверхности. Поэтому при очень разбавленной моче полоска покажет отрицательный результат, даже если протеинурия составит больше 50 или даже 70 мг.

Для того чтобы избежать подобных «недочетов» лабораторных методов диагностики, исследование мочи лучше всего проводить утром, когда ее концентрация является наибольшей. Если же при общем анализе выявлена протеинурия более 0,033 г/л, для ее подтверждения проводиться исследование на суточное содержание белка.

Протеинурия — явление, при котором в моче определяется белок, что указывает на возможность поражения почек, служит фактором развития болезней сердца, кровеносных, лимфатических сосудов.

Что означает белок в моче (протеинурия)

Обнаружение белка в урине не всегда указывает на болезнь. Подобное явление свойственно даже для абсолютно здоровых людей, в урине которых может определяться белок. Переохлаждение, физические нагрузки, употребление белковой пищи приводит к появлению в моче белка, который без всякого лечения исчезает.

Во время скрининга у 17% практически здоровых людей определяется белок, но только 2% от этого числа людей положительный результат анализа служит признаком болезни почек.

Белковые молекулы не должны попадать в кровь. Они жизненно необходимы организму — являются строительным материалом для клеток, участвуют в реакциях в качестве коферментов, гормонов, антител. И у мужчин, и у женщин норма — полное отсутствие белка в моче.

Функция предотвращения потери организмом белковых молекул выполняется почками.

Фильтрацией мочи занимаются две системы почек:

почечные клубочки – не пропускают крупные молекулы, но не удерживают альбумины, глобулины – мелкую фракцию белковых молекул;
почечные канальца – адсорбируют белки, отфильтрованные клубочками, возвращают обратно в кровеносную систему.

В моче обнаруживаются (около 49%), мукопротеины, глобулины, из которых на долю иммуноглобулинов приходится около 20%.

Глобулины — сывороточные белки в большой молекулярной массой, которые вырабатываются в иммунной системе и печени. Большая их часть синтезируется иммунной системой, относится к иммуноглобулинам или антителам.

Альбумины — фракцию белков, которые первыми появляются в моче уже при незначительных поражениях почек. Некоторое количество альбуминов есть и в здоровой моче, но оно столь незначительно, что не выявляется с помощью лабораторной диагностики.

Нижний порог, который можно обнаружить при помощи лабораторной диагностики, составляет 0,033 г/л. Если в сутки теряется более 150 мг белка, то говорят о протеинурии.

Основные данные о белке в моче

Симптомы белка в моче

Заболевание при легкой степени протеинурии протекает бессимптомно. Визуально мочу, не содержащую белка, невозможно отличить от урины, в которой есть незначительное количество белка. Несколько пенистой урина становится уже при высокой степени протеинурии.

Предположить активное выведение белка с мочой можно по внешнему виду больного лишь при средней или тяжелой степени болезни по появлению отеков конечностей, лица, живота.

На ранних стадиях заболевания косвенными признаками протеинурии могут служить симптомы:

изменения окраски мочи;
усиливающейся слабости;
отсутствия аппетита;
тошноты, рвоты;
боли в костях;
сонливости, головокружениям;
повышенной температуры.

Появление подобных признаков нельзя оставлять без внимания, особенно при беременности. Подобное может означать и незначительное отклонение от нормы, а может оказаться симптомом развивающегося гестоза, преэклампсии.

Диагностика

Количественная оценка потери белка – задача непростая, для достижения более полного представления о состоянии больного пользуются несколькими лабораторными анализами.

Трудности в выборе способа выявления избыточного белка в моче объясняются:

низкой концентрацией белка, для распознавания которой требуются высокоточные приборы;
составом мочи, усложняющим задачу, так как она содержит вещества, искажающие результат.

Как подготовиться к анализам

Наибольшую информацию позволяет получить анализ первой утренней порции мочи, которую собирают после пробуждения.

Накануне проведения анализа необходимо соблюдать условия:

не употреблять острой, жареной, белковой пищи, алкоголь;
исключить прием диуретиков за 48 часов;
ограничить физическую активность;
тщательно соблюдать правила личной гигиены.

Утренняя моча наиболее информативна, так как длительно находится в мочевом пузыре, в меньшей степени зависит от приема пищи.

Анализировать количество белка в моче можно по случайной порции, которую отбирают в любое время, но такой анализ менее информативен, выше вероятность ошибки.

Для количественной оценки суточных потерь белка делают анализ общей суточной мочи. Для этого в течение 24 часов собирают в специальный пластиковый контейнер всю мочу, выделенную за день. Начинать сбор можно в любой момент времени. Главное условие – ровно сутки сбора.

Качественные способы диагностики

Качественное определение протеинурии основано на свойстве белка денатурировать под действием физических или химических факторов. Качественные методы относятся к скрининговым, позволяющим установить наличие белка в моче, но не дающим возможности точно оценить степень протеинурии.

Используется пробы:

с кипячением;
сульфосалициловой кислотой;
азотной кислотой, реактивом Ларионовой при кольцевой пробе Геллера.

Пробу с сульфосалициловой кислотой выполняют, сравнивая контрольный образец мочи с опытным, в котором к урине добавляют 7-8 капель 20% сульфосалициловой кислоты. Вывод о присутствии белка делают по интенсивности опалесцирующей мути, появляющейся в пробирке в ходе реакции.

Чаще применяют пробу Геллера с использованием 50% азотной кислоты. Чувствительность метода составляет 0,033 г/л. При такой концентрации белка в пробирке с образцом мочи и реагентом на 2-3 минутах после начала опыта появляется нитевидное кольцо белого цвета, образование которого и указывает на присутствие белка.

Проба Геллера

Полуколичественные

К полуколичественным методам относятся:

способ определения белка в моче тест-полосками;
метод Брандберга-Робертса-Стольникова.

Способ определения по методу Брандберга-Робертса-Стольникова основан на кольцевом методе Геллера, но позволяет более точно оценить количество белка. При выполнении теста по этой методике несколькими разведениями урины добиваются появления нитевидного белкового кольца во временном промежутке между 2- 3 минутами с начала тестирования.

В практике используется метод тест-полосок с нанесенным красителем бромфеноловым синим в качестве индикатора. Недостатком тест-полосок является избирательная чувствительность к альбумину, что приводит к искажению результата в случае повышения в моче концентрации глобулинов или других белков.

К минусам метода относится также относительно низкая чувствительность теста к белку. Реагировать на присутствие белка в моче тест полоски начинают при концентрации белка, превышающей 0,15 г/л.

Количественные методы оценки

Методы количественной оценки можно разделить условно на:

турбидиметрические;
колориметрические.

Турбидиметрические методики

Методы основаны на свойстве белков снижать растворимость под действием связывающего агента с образованием малорастворимого соединения.

Агентами, вызывающими связывание белка, могут выступать:

сульфосалициловая кислота;
трихлоруксусная кислота;
бензетоний хлорид.

О результатах тестов делают выводы на основании степени ослабления светового потока в образце с суспензией по сравнению с контрольным. Результаты этого метода не всегда можно отнести к достоверным из-за различий в условиях проведения: скорости смешивания реагентов, температуры, кислотности среды.

Влияют на оценку прием лекарственных препаратов накануне, перед проведением тестов по данным методам нельзя принимать:

антибиотики;
сульфаниламиды;
йодсодержащие препараты.

Метод относится к доступным по себестоимости, что позволяет его широко использовать для скрининга. Но более точные результаты можно получить с помощью более дорогостоящих колориметрических методик.

Колориметрические методы

К чувствительным методам, позволяющим точно определить концентрацию белка в моче, относятся колориметрические методики.

Сделать это с высокой точностью позволяют:

биуретовая реакция;
методика Лоури;
окрашивающие методики, в которых используются красители, образующие с белками мочи комплексы, отличающиеся от образца визуально.

Колориметрические методы выявления белка в моче

Биуретовая реакция

Метод относится к надежным, обладающим высокой чувствительностью, позволяющий определять в моче альбумин, глобулины, парапротеины. Используется в качестве основного способа уточнения спорных результатов анализов, а также суточного белка в моче у больных нефрологических отделений стационаров.

Метод Лоури

Еще более точных результатов позволяет добиться метод Лоури, который основан на биуретовой реакции, а также реакции Фолина, распознающей триптофан и тирозин в молекулах белков.

Для исключения возможных ошибок пробу урину очищают с помощью диализа от аминокислот, мочевой кислоты. Ошибки возможны при употреблении салицилатов, тетрациклинов, хлорпромазина.

Окрашивающие методики

Наиболее точный способ определения белка основан на его свойстве связываться с красителями, из которых используются:

понсо;
кумасси бриллиантовый синий;
пирогалловый красный.

Суточная протеинурия

В течение дня количество белка, выделяемое с мочой, изменяется. Чтобы более объективно оценить потери белка с мочой, вводят понятие суточного белка в моче. Эта величина измеряется в г/сутки.

Для быстрой оценки суточного белка в моче, в разовой порции мочи определяют количество белка и креатинина, затем по соотношению белок/креатинин делают вывод о потери белка в сутки.

Метод основан на том, что скорость выведения с мочой креатинина — величина постоянная, не изменяется в течение суток. У здорового человека в норме соотношение белок: креатинин в моче составляет 0,2.

Этот способ исключает возможные ошибки, которые могут возникнуть при сборе суточной мочи.

Расшифровка результатов

Качественные пробы чаще, чем количественные тесты, дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Ошибки возникают в связи с приемом лекарств, особенностями питания, физической нагрузки накануне сдачи анализа.

Тест с сульфосалициловой кислотой

Расшифровка этого качественного теста дается по визуальной оценке помутнения в пробирке в сравнении результата теста с контрольной:

слабоположительная реакция оценивается, как +;
положительная ++;
резко положительная +++.

Проба Геллера

Кольцевая проба Геллера более точно оценивает присутствие белка в моче, но не позволяет дать количественную оценку белка в моче. Как и тест с сульфосалициловой кислотой, проба Геллера дает лишь приблизительное представление о содержании белка в урине.

Тест Брандберга-Робертса-Стольникова

Метод позволяет оценить степень протеинурии количественно, но слишком трудоемок, неточен, так как при сильном разведении точность оценки снижается.

Чтобы вычислить белок, нужно умножить степень разведения мочи на 0, 033 г/л:

Объем урины (мл)	Объем воды (мл)	Разведение	Содержание белка (г/л)
1	1	1: 2	0,066
1	2	1: 3	0,099
1	3	1: 4	0,132
1	4	1: 5	0,165
1	5	1: 6	0,198
1	6	1: 7	0,231
1	7	1: 8	0,264
1	8	1: 9	0,297
1	9	1: 10	0,33

Тестирование тест-полоской

Проведение теста не требует специальных условий, эту процедуру легко проделать в домашних условиях. Для этого необходимо тест-полоску опустить в мочу на 2 минуты.

Результаты будут выражаться количеством плюсов на полоске, расшифровка которой содержится в таблице:

Результаты тестирования, соответствующие значением до 30 мг/100 мл соответствуют физиологической протеинурии.
Значения на тест-полосках 1+ и 2++ означают значительную протеинурию.
Значения 3+++, 4++++ отмечаются при патологической протеинурии, вызванной заболеваниями почек.

Тест-полоски позволяют лишь приблизительно определить повышенный белок в моче. Для точной диагностики их не используют, а уж тем более они не могут сказать что это значит.

Не позволяют тест-полоски адекватно оценить количество белка в моче у беременных. Более надежным способом оценки служит определение белка по суточной моче.
Определение белка в моче при помощи тест-полоски:

Общий белок в моче

Суточный белок в моче служит более точной диагностикой оценки функционального состояния почек. Для этого необходимо собрать всю мочу, выделяемую почками за сутки.

Допустимыми значениями для соотношения белок/креатинин считаются данные, приведенные в таблице:

При потере более 3,5 г белка в сутки состояние называется массивной протеинурией.

Если в моче много белка требуется повторное обследование через 1 месяц, затем через 3 месяца, по результатам, которых устанавливается почему норма превышена.

Причины

Причинами повышенного белка в моче является его увеличенное производство в организме и нарушение работы почек, различают протеинурию:

физиологическую – незначительные отклонения от нормы вызываются физиологическими процессами, разрешаются самопроизвольно;
патологическую – изменения вызываются в результате патологического процесса в почках или других органах тела, без лечения прогрессирует.

Физиологическая протеинурия

Небольшое повышение белка может наблюдаться при обильном белковом питании, механические ожогах, травмах, сопровождающихся усилением выработки иммуноглобулинов.

Легкая степень протеинурии может быть вызвана физической нагрузкой, психо-эмоциональным напряжением, приемом некоторых лекарств.

К физиологической протеинурии относится повышение белка в моче у детей в первые дни после рождения. Но уже после недели жизни содержание белка в моче у ребенка рассматривается, как отклонение от нормы и указывает на развивающуюся патологию.

Заболевания почек, инфекционные заболевания также иногда сопровождаются появлением белка в моче.

Подобные состояния соответствуют обычно легкой степени протеинурии, являются преходящими явлениями, быстро самостоятельно проходят, не требуя специального лечения.

Патологическая протеинурия

Более тяжелые состояния, выраженная протеинурия отмечается в случае:

диабета;
болезней сердца;
раке мочевого пузыря;
множественной миеломе;
инфекции, лекарственном поражении, поликистозе почек;
высоком кровяном давлении;
системной красной волчанке;
синдроме Гудпасчера.

Вызвать следы белка в моче может кишечная непроходимость, сердечная недостаточность, гипертиреоз.

Классификация

Разновидности протеинурии классифицирует несколькими способами. Для качественной оценки белков, воспользоваться можно классификацией Ярошевского.

По систематике Ярошевского, созданной в 1971 году, различают протеинурию:

ренальную – куда входит нарушение клубочковой фильтрации, выделение белка канальцев, недостаточность реадсорбции белков в канальцах;
преренальная – возникает вне почек, выведение из организма гемоглобина, белков, возникающих в избытке в крови в результате множественной миеломы;
постренальная – возникает на участке мочевыводящих путей после почек, выведение белка при разрушении мочевыводящих органов.

Для количественной оценки происходящего выделяют условно степени протеинурии. Нужно помнить, что они могут легко переходить в более тяжелую без лечения.

Самая тяжелая стадия протеинурии развивается при потере более 3 г белка в сутки. Потеря белка от 30 мг до 300 мг в сутки соответствует умеренной стадии или микроальбумнурии. До 30 мг белка в суточной моче означает легкую степень протеинурии.

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70% белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида - белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50-150 мг/сут, причем большинство белков мочи идентично сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией.

В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, от 1 до 3 г - среднюю и более 3 г - выраженную.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи. Наиболее точны методы электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле.
По результатам, полученным этими методами, можно судить о селективности протеинурии.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой:

Необходимый реактив:

20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход исследования:

В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку прибавляют 6-8 капель реактива. На темном фоне сравнивают контрольную пробирку с опытной. Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, пробу считают положительной.

Если реакция мочи щелочная, то перед исследованием ее подкисляют 2-3 каплями 10%-ного раствора уксусной кислоты.

Унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова:

В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Необходимый реактив:

30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива Ларионовой: 20-30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1-2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутой указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).

Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты:

Принцип метода:

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы:

1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина - 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование - фотоэлектроколориметр.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод:

Принцип метода:

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной с образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы:

1. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
2. 20%-ный раствор меди (CuSO4∙5H2O).
3. 3%-ный раствор NaOH.

Ход исследования:

К 5 мл мочи, взятой из суточного количества, прибавляют 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок затем растворяют в 5 мл раствора NaОН. К раствору добавляют 0,25 мл CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фотометрируют при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочной кривой, при построении которой на оси ординат откладывают концентрацию белка (г/л), а на оси абсцисс - оптическую плотность в единицах экстинкции. По полученной концентрации рассчитывают суточную потерю белка с мочой.

С помощью индикаторной бумаги (полосок):

Белок может быть обнаружен с помощью индикаторной бумаги (полосок), которые выпускаются фирмами “Albuphan”, “Ames” (Англия), “Albustix”, “Boehringer” (Германия), “Comburtest” и др.

Принцип основан на феномене так называемой протеиновой ошибки некоторых кислотно-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги буфер растворяется и обеспечивает соответствующий рН для реакции индикатора.

При 3,0-3,5 аминогруппы белков реагируют с индикатором и меняют его первоначально желтую окраску на зеленовато-синюю, после чего, сравнивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию белка в исследуемой моче. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение pH в диапазоне 3,0-3,5 для протекания реакции.

Если бумага находится в контакте с исследуемой мочой дольше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер в ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН мочи, т.е. дает ложноположительную реакцию. В связи с тем, что емкость буфера ограничена, то даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (pH > 6,5) получаются ложноположительные результаты, а в пробах слишком кислой мочи (рН
Число реагирующих аминогрупп в составе отдельных белков различно, поэтому альбумины реагируют в 2 раза интенсивнее, чем такое же количество γ-глобулинов (белок Бенс-Джонса, парапротеины), и гораздо интенсивнее, чем гликопротеиды. Однако при большом количестве слизи с высоким содержанием гликопротеидов (при воспалении мочевыводящих путей) оседающие на индикаторной полоске хлопья слизи могут давать ложноположительные результаты.

Чувствительность отдельных производственных серий индикаторной бумаги, равно как и отдельных видов бумаги, выпускаемых одной и той же фирмой, может быть различной, поэтому к количественной оценке белка этим методом следует относиться осторожно. Определение суточной потери белков с мочой при помощи индикаторной бумаги невозможно. Таким образом, индикаторная бумага уступает химическим пробам, в первую очередь пробе с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает возможность быстрого исследования серии образцов.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса:

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип:

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °С или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40-60 °С, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактивы:

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования:

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Определение альбумоз (протеоз):

Альбумозы - это продукты расщепления белков, принцип определения которых основан на том, что они не сворачиваются при кипячении, но дают положительную биуретовую реакцию и высаливаются некоторыми солями, особенно сульфатом аммония и ацетатом цинка в кислой среде.

Нормальная моча альбумоз не содержит. Следы могут быть в нормальной моче в случае примеси семенной жидкости. В патологии альбумозы могут встречаться в моче при лихорадочных состояниях, переливании крови и плазмы, рассасывании экссудатов и транссудатов, распаде опухолей.

Необходимые реактивы:

1. Насыщенный раствор хлорида натрия.
2. Концентрированный раствор едкого натра.
3. Слабый раствор сульфата меди (почти бесцветный).

Ход исследования:

К моче, подкисленной уксусной кислотой, прибавляют насыщенный раствор хлорида натрия (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят в фильтрат, в котором их присутствие определяют биуретовой реакцией. К фильтрату прибавляют 1/2 объема концентрированного раствора едкого натра и несколько капель слабого раствора сульфата меди. При положительной пробе получается красно-фиолетовое окрашивание.

При положительной пробе с сульфосалициловой кислотой мочу нагревают. Если муть исчезает и вновь появляется при охлаждении, это означает, что моча содержит альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса.

Множество заболеваний протекают без выраженных клинических проявлений, поэтому определение белка в моче с целью своевременного выявления и лечения патологического состояния является важным моментом для практической медицины.

Белок в моче может определяться качественными и количественными методами.

Качественные методы

На данный момент существует около 100 известных качественных реакций на белок. Они заключаются в осаждении протеина методом физических или химических воздействий. При положительной реакции происходит помутнение.

Наиболее информативными являются пробы:

С сульфосалициловой кислотой. Считается наиболее чувствительной и с ее помощью возможно определение даже самых незначительных количеств белковых тел в моче. Описание результата при следовом присутствии протеина обозначается термином «опалесценция», а при большем количестве - «слабо положительная», «положительная» и при большой потере белка с мочой - «сильно положительная реакция».
С заместителем кислоты - асептолом. В урину добавляется раствор вещества, и при образовании кольца на границе растворов, говорится о том, что проба является положительной.
Геллера. Производится при помощи раствора азотной кислоты. Итог проведения трактуется аналогично той, что с асептолом. Иногда кольцо может быть во время присутствия в исследуемой жидкости уратов.
С уксусной кислотой с добавлением селезистосинеродистого калия. При высокой концентрации мочи при проведении такой пробы, ее разбавляют, иначе может получиться ложноположительный результат, так как реакция будет на ураты и мочевую кислоту.

Неправильное проведение такой пробы часто может давать неверный результат у новорожденных детей, так как у них моча образуется с высоким содержанием мочевой кислоты.

Основные правила при проведении проб заключаются в следующем - необходимо, чтобы исследуемая моча была прозрачная, имела слабокислую среду (для этого иногда добавляют в нее небольшое количество уксусной кислоты), пробирок должно быть две для осуществления контроля.

Количественное определение

Когда проводится анализ мочи, общий белок определяется и количественными методами. Их достаточно много, но чаще всего применяются следующие:

Метод Эсбаха. Используется еще с 19 века. Для этого в определенную пробирку наливается моча и реактив. Потом смесь немного взбалтывают, и в закрытом виде оставляют на 24−48 часов. Полученный осадок считается по делению на пробирке. Правильный вывод можно сделать только при кислой моче. Такая методика достаточно проста, но не имеет высокой точности и требует затрат времени.
Метод Брандберга-Стольникова. Основан на пробе Геллера, которая позволяет получить результат при концентрации протеина более 3,3 мг%. Позднее такой способ был модифицирован и упрощен.
Широко используются нефелометрические методы установления количества белка.

Для полного понимания количества протеина, лучше всего использовать анализ мочи на суточный белок.

Для правильного результата первая утренняя порция выливается, сбор начинается со второй порции в одну емкость, которую рекомендуется держать в холодильнике.

Последняя порция собирается утром. После этого необходимо измерить объем, затем тщательно перемешать, и отлить в баночку порцию не более 50мл. Эту емкость и следует сдать в лабораторию. На специальном бланке требуется указать результаты общего объема суточной мочи, а также рост и вес пациента.

Применение тест-полосок

Тест на белок в моче действует по принципу индикаторов. Специальные полоски могут изменять свою окраску в зависимости от концентрации протеина. Они удобны для определения изменений, которые происходят в разное время, и применяются как в условиях дома, так и любых лечебных и профилактических учреждениях.Тест-полоски

Тестовые мочевые полоски используются при необходимости раннего определения и отслеживания результатов лечения при мочеполовых патологиях. Такая методика диагностики является чувствительной, и реагирует на альбумин в его концентрации от 0,1 г/л., и позволяет определить качественное и полуколичественное изменение содержания в моче белка.

По результатам этой диагностики можно контролировать эффективность терапии, вносит в нее поправки, и назначить необходимую диету.

Когда в моче повышен белковый показатель, такая ситуация вызывает настороженность у взрослого человека. Неудивительно, ведь протеинурия считается маркером проблем с почками. Норма белка в моче – это когда его нет вообще либо определяется незначительное количество протеинов. О чем говорит превышение допустимых отклонений показателей?

Кому и зачем назначают обследование на протеинурию?

Когда может понадобиться анализ на белок в моче? Причин для такого исследования есть несколько. Например, если врач обнаружит у пациента такие симптомы нефропатии, как отек ног, набор веса, уменьшение количества урины, повышенную утомляемость, гипертонию, анализ на содержание белка в моче поможет подтвердить диагноз. Обследоваться периодически необходимо людям, которые входят в категорию риска развития хронической дисфункции почек. Контроль белка в моче позволяет вовремя обнаружить ХПН. К факторам риска относится наследственность, пожилой возраст, курение, ожирение, болезни почек. При сахарном диабете, а также иных системных болезнях (волчанке, амилоидозе), которые негативно влияют на почки, также периодически проводят анализ на наличие белка в моче. По нему можно оценить степень поражения органа.

Необходимо такое исследование, когда для лечения каких-то заболеваний назначают нефротоксические препараты. Анализ на повышенный белок в моче помогает понять, насколько почки нормально функционируют. Многие препараты, в том числе и обычный аспирин с пенициллином, способны повредить почки. Если после назначения лекарств обнаруживают белок в анализе мочи, следует скорректировать терапию. Данный анализ помогает диагностировать первичные гломерулопатии, липоидный нефроз, мембранозный гломерулонефрит и схожие патологии, провоцирующие повышенное содержание белков в моче.

Исследование биоматериала на протеины

Методы определения белка в моче подразделяют на качественные, количественные, полуколичественные. Качественные применяют для скрининга, так как их результаты не особо надежные. Основаны такие методики на свойствах протеинов к денатурации при химических и физических воздействиях. Во время качественного определения белка в моче образец должен быть прозрачным, иначе присутствие белкового осадка сложно будет различить. Если образец мутный, в него добавляют тальк либо магнезию и фильтруют. Наиболее распространенные качественные анализы – методика Геллера, реакция с сульфосалициловой кислотой.

Полуколичественным является унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова и экспресс-методы. Удобны они тем, что позволяют легко определить высокое содержание протеинов в моче в домашних условиях. Образец собирается по правилам, затем в него опускают специальные тест-полоски. Проверяется либо суточная моча на белок, либо разовая порция. Оценивают результат по цветовой шкале или с помощью анализатора.

Количественное определение белка в моче предпочтительнее, но требуют соблюдения множества специфических условий. Поэтому и такие пробы нередко дают ложные результаты. Наиболее точными считаются колориметрические пробы, которые базируются на цветовых реакциях белковых структур. Это биуретовый метод, тест Лоури, метод ПКГ (реакция с пирогаллоловым красным). Практически все количественные пробы для определения белка в моче чувствительны только к альбуминам. Наличие глобулинов, мукопротеинов либо структур Бенс-Джонса такое исследование не покажет. Поэтому если анализ на общий белок в моче отрицательный, но врач подозревает патологию, назначают дополнительные диагностические процедуры. Для выявления разных типов протеинов используют иммунохимические исследования и эректрофорез.

Несмотря на то, что и общий анализ мочи (ОАМ), проведенный по разовой утренней порции может показать наличие протеинов, для обнаружения патологии почек рекомендуется исследовать суточный белок в моче. Связано это с тем, что в течение дня выделение протеинов колеблется, и диурез влияет на их концентрацию. Если нет возможности сдать суточный анализ мочи на белок, рекомендуется провести расчет в разовой порции соотношения протеина с креатинином, поскольку он постоянно выделяется с одинаковой скоростью. Преимущество такой диагностики еще и в том, что исключаются ошибки, связанные со сложностями самостоятельно правильно собрать суточную мочу.

Расшифровка результатов

Если при проведении исследования обнаружен белок в моче, что это значит? О чем говорят различные показатели? Хотя именно отсутствие белка в моче считается нормой (в бланке отмечается обозначением abs), небольшое его содержание – это не повод бить тревогу. Необходимо смотреть на клиническую картину в целом.

Референсные значения при исследовании разовой утренней порции – до 0,15 г/л. При оценке суточной протеинурии в состоянии покоя пациента показатель не должен превышать 0,14 г/сут. Если имела место повышенная физическая нагрузка, то допустимой считается концентрация до 0,3 г/сут.

Превышение данных показателей классифицируется, как протеинурия (альбуминурия). При измерении суточной экскреции по степени выраженности различается:

Физиологическое превышение или следы белка в моче – до 300 мг/сут.
Низкая суточная потеря белка – до 500 мг/сут.
Протеинурия умеренная – до 3 г/сут.
Выраженная экскреция протеинов – более 3 г/сут.

Мизерный объем белка в общем анализе мочи не всегда определяется, поэтому при жалобах пациента и характерных симптомах рекомендуется более тщательная диагностика. Для соотношения белок-креатинин в моче нормой считается показатель 0,2. Полное отсутствие либо крайне низкий уровень белка в моче не несет диагностического значения.

Почему в анализе может появляться протеин?

Содержание белковых структур в мочевой жидкости зависит от всасывания почечных канальцев, особенностей кровообращения и состояния гломерулярной фильтрационной системы. Причины протеинурии связаны с нарушением этих механизмов, чаще это происходит под влиянием физиологических факторов и лишь в 2% всех случаев выявления протеинов причиной являются заболевания почек или другие серьезные патологии. Именно снижение способности парного органа к нормальной фильтрации приводит к превышающей норму экскреции белковых элементов в мочевыводящие пути. Появляется белок в моче при следующих проблемах с почками:

липоидном нефрозе, гломерулонефритах, синдроме Фанкони, при пиелонефрите, гломерулярном склерозе, иных первичных почечных патологиях;
повреждении почек при гипертензии, преэклампсии, злокачественных опухолях, сахарном диабете, системных патологиях соединительной ткани, пр.;
нарушении функции почек из-за отравления свинцом или ртутью;
камнях в почках;
почечной карциноме – раке органа;
поражении почечной тканей при нефротоксичной терапии;
воспалении почек из-за простуды, вызванной сидением на холодной поверхности.

Почему белок в моче может появиться, когда нет проблем с почками? Протеинурия может быть связана с гиперфункцией щитовидной железы, мочекаменной болезнью, сердечной патологией, различными травмами, инфекциями выделительной системы. Экскреция белка с мочой возможна при поражении ЦНС, запущенной пневмонии, гастрите, гестозе у беременных, туберкулезе у пожилых людей.

Протеинурия иногда возникает из-за увеличенного образования белковых структур в организме. Превышение концентрации протеинов вызывает миеломная болезнь, повреждение мышц, гемоглобинурия, макроглобулинемия. Причины появления белка в моче могут быть вполне безобидными. Такую протеинурию называют физиологичной или временной, потому что она проходит без лечения. Например, при сильной нагрузке у спортсменов может быть обнаружено много белка в биоматериале (маршевая протеинурия). Транзиторное увеличение показателей случается при фимозе у мальчиков, аллергии, переохлаждении, глистах, после операции в области брюшной полости, а также после гриппа либо ОРВИ. Положительная реакция на белок в моче проявляется после сильного стресса, при лихорадочных состояниях, обезвоживании, протеиновой диете, длительном голодании.

Диагностика

Различают виды протеинурии по патогенезу (механизмам образования), времени появления, степени выраженности, локализации источника патологии. Все они описаны в Международной классификации болезней. Повышение белка в мочевой жидкости имеет код МКБ-10 R80. По месту развития патологических процессов выделяется:

Протеинурия преренальная – распад белковых структур усиленно протекает в тканях либо активно разрушаются эритроциты, секретируя большое количество гемоглобина.
Протеинурия ренальная – патология наблюдается в почечных канальцах и клубочках. Если поврежден именно гломерулярный фильтр – это протеинурия клубочковая. При неспособности канальцевой системы почек реабсорбировать альбумины из плазмы крови говорят о протеинурии тубулярной.
Протеинурия постренальная – диагностируется при болезнях нижних отделов мочевыделительной системы (мочевого пузыря, уретры, половых органов, мочеточника).

Дифференциальная диагностика протеинурии между тубулярной и клубочковой формами проводится на основании количества обнаруженного белка, а также сопутствующих симптомов. При поражении клубочков часто наблюдается выраженная протеинурия, которая сопровождается отеками тканей. При патологии канальцев экскреция альбуминов не так выражена. Для уточнения диагноза смотрят и на такие параметры урины, как лейкоциты, эритроциты, бактерии, слизь, сахар, нитриты.

По тому, какие именно белковые структуры проникают в мочу, протеинурия бывает селективной, когда выделяются в биоматериал исключительно альбумины и другие микропротеины. При протеинурии неселективной в образце, кроме низкомолекулярных, появляются структуры со средней и высокой молекулярной массой (глобулины, липопротеиды).

Чтобы диагностика была достоверной, важно соблюдать правила сбора образца и подготовки к анализу, зависят они от назначенного метода исследования.

Люди часто интересуются, что нельзя есть перед сдачей мочи? На самом деле, особых ограничений по продуктам нет, разве что не рекомендуется обильное белковое питание. В течение суток перед тем, как собирать биоматериал, нельзя употреблять алкоголь. На результаты также влияет прием некоторых препаратов (антибиотиков, аспирина) и неправильно собранный биоматериал. Мочегонные средства нельзя использовать в течение 2-х дней перед анализом.

Сама по себе протеинурия не дает оснований для постановки диагноза, чтобы уточнить причины выделения белка с мочой, необходимы дополнительные анализы, инструментальная диагностика и сбор анамнеза.

Симптомы и риски протеинурии

Дефицит различных протеинов в организме может не ощущаться, если их потеря невелика. Когда же обнаружено белка в моче достаточно много, этот процесс сопровождается характерными симптомами протеинурии:

отеками тканей, особенно в области нижних конечностей и лица;
снижением онкотического кровяного давления;
асцитом – скоплением жидкости в брюшной полости;
слабостью в мышцах, ощущением ломоты в костях;
сонливостью, головокружением;
тошнотой, ухудшением аппетита;
неприятным запахом урины (в случае опухоли мочевого пузыря, например, моча пахнет тухлым мясом).

Каждое состояние, при котором в мочевой жидкости повышен белок, имеет специфические признаки. Например, для диабета характерно повышенное давление, жажда, частое мочеиспускание. При гестозе нередко повышенное количество белка в моче сочетается с низким уровнем гемоглобина.

Чем опасен избыток экскреции в мочу белка? При большой потере различных видов протеинов могут проявиться достаточно тяжелые осложнения. К таковым относится повышение свертываемости крови, тромбоз, снижение сопротивляемости к инфекциям, атеросклероз, плохое заживление ран, снижение функции щитовидной железы, аномальное повышение липидов и нехватка кальция в крови, пр.

Что делать, если белковые показатели выше нормы?

Как уменьшить белок в моче? Это закономерный вопрос для тех, кто столкнулся с такой проблемой. Важно понимать, что выбор лечебных мероприятий зависит от того, что является первопричиной высокого белка. Если всему виной почечная патология или другое серьезное заболевание, лечить пациента должны профессионалы. Никакими народными средствами в таких ситуациях увлекаться не стоит без консультации с врачом. Из препаратов, снижающих уровень протеинов, применяют цитостатики, кортикостероиды, антиагреганты, антибактериальные таблетки в случае инфекции. Для лечения протеинурии у детей и беременных используют более безопасные препараты, например, канефрон на травах. Если появление белка в моче временное, лечение специальное не требуется.

Как избавиться от белка в моче, если причины не патологические? В первую очередь следует подумать не о препаратах, а о диете, которая способна понизить нагрузку на почки. Полезно будет убрать из рациона тяжелые белковые продукты животного происхождения, лучше кушать растительные протеины. Снизить белок в моче помогут проверенные народные рецепты. Хорошие белково- выводящие свойства показывает клюква. Из ягоды можно делать морсы или кашицы. Настои из петрушки, березовых почек, липы с лимоном также способны оказать благоприятное воздействие на почки и вывести белок из мочи. Применяют в этих целях и продукты пчеловодства.

Важно осознать, что эффективность лечения напрямую зависит от своевременной диагностики, поэтому врачи рекомендуют хотя бы раз в год сдавать анализ мочи на протеины в качестве профилактики.